Конопляников А.Г. *, Белый Ю.А., Терещенко А.В., Володин П.Л., Плахотний М.А.
(Калужский филиал ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росздрава», г. Калуга *ГУ Медицинский радиологический научный центр РАМН; 249036, г. Обнинск, Калужской обл., ул. Королева, 4, Россия; e-mail: konopl@mrrc.obninsk.ru)
Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) является одним из наиболее распространенных заболеваний органа зрения как в нашей стране, так и за рубежом. Патологические изменения, связанные с ВМД, приводят к стойкой и необратимой утрате зрительных функций, что в свою очередь значительно ухудшает качество жизни пациентов.
Известно, что одним из перспективных методов лечения дистрофической патологии сетчатки может явиться применение мезенхимальных стволовых клеток (МСК), однако, такие методы еще недостаточно разработаны.
Цель исследования - разработка комбинированной технологии лечения ВМД, включающей использование низкоинтенсивного лазерного излучения и внутривенного (системного) введения аутологичных МСК.
Материалы и методы. Под наблюдением находилось 3 пациента (3 глаза) с «сухой» формой ВМД в возрасте от 64 до 75 лет. Острота зрения до лечения у пациентов варьировала от 0,2 до 0,5. За 3 часа до внутривенного (системного) введения аутологичных культивированных МСК костного мозга пациента проводили транспупиллярное лазерное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением с длиной волны 660 нм, диаметром пятна 6 мм, в дозе 0,3-1,0 Дж/см2. Облучение проводили на аппарате «АЛОД-01» («Алком-Медика», СПб).
Для получения клеток костного мозга с целью последующего культивирования МСК, содержащихся в костномозговой популяции, пациентам под местной новокаиновой анестезией проводили пункцию грудины или подвздошной кости и извлекали в строго стерильных условиях примерно 1 мл костного мозга, который помещали в пробирки с раствором гепарина (100 ЕД/мл пунктата). После отстаивания эритроцитов в течение 1-2 часов при комнатой температуре супернатант отсасывали пастеровской пипеткой, выделенные клетки отмывали в среде 199, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин, осадок ресуспендировали в ростовой среде.
В качестве ростовой среды использовали среду RPMI-1640, содержащую пенициллин (100 ЕД/мл), амфотерицин (100 нг/мл), L-глютамин 2 мМ, 20% эмбриональной телячей сыворотки (все реактивы и посуда фирмы “Sigma”,USA).
Культивирование проводилось в стерильных пластиковых флаконах Карреля c площадью дна 25 см2, в которые вносили 5х106-107 клеток костного мозга в 8 мл ростовой среды. Флаконы продували газовой смесью, содержащей 5% углекислого газа и 95% воздуха, и помещали их в обычный термостат 37°С. Продувание флаконов такой газовой смесью проводили каждый раз, когда меняли среду или пересевали клетки в новые культуральные флаконы.
При достижении сливного (конфлюентного) монослоя клетки пересевали с использованием 0,25% раствора трипсина в новые флаконы вначале с той же площадью дна (25 см2), а впоследствии при нарастании клеточной массы - в большие культуральные флаконы с площадью дна 175 см2.
Такой метод позволял к концу 5-6 недели добиться получения популяции аутологичных МСК пациента в количестве (1-2)х108 клеток, необходимых для трансплантации в организм донора исходного костного мозга. Полученные путем культивирования аутологичные МСК после заключительного снятия трипсином с поверхности культуральных флаконов и отмывки физиологическим раствором взвешивали в 200 мл стерильного физиологического раствора с прибавлением гепарина в концентрации 10 ед/мл. Полученную клеточную суспензию использовали для постановки капельницы, продолжительность введения клеток составляла 40-60 мин.
Для оценки эффективности предлагаемого способа до и после лечения проводилось определение остроты зрения, фовеальной чувствительности сетчатки, исследование электрофизиологических показателей, глазной и регионарной гемодинамики.
Результаты. Через месяц после проведенного лечения у пациентов наблюдали следующие результаты терапии. В 2-х случаях острота зрения повысилась (на 0,2 и 0,32, соответственно) и в одном осталась неизменной. Во всех случаях отмечено повышение фовеальной светочувствительности сетчатки по данным компьютерной периметрии, а также увеличение амплитуды а-волны и б-волны по данным макулярной электроретинограммы, которое свидетельствовало о повышении функциональной активности сетчатки.
При исследовании гемодинамики у всех пациентов отмечалось увеличение средней скорости кровотока в глазничной артерии, центральной артерии сетчатки и в задних коротких цилиарных артериях.
Полученные результаты оставались стабильными в сроки от 6 до 12 месяцев.
Таким образом, полученные предварительные клинико-функциональные данные указывают на перспективность применения предлагаемой технологии в лечении возрастной макулярной дегенерации.
См. также:
Аутологичные фибробласты в косметологии
Влияние искусственных поверхностей на остеогенную дифференцировку пула мезенхимальных стромальных клеток костного мозга in situ
Аллогенные клеточные трансплантации пренатальных и постнатальных мультипотентных стромальных клеток в лечении хронической сердечной недостаточности у пациентов с дилатационной кардиомиопатией
Стволовые потенции перисинусоидальных клеток Ито
Биохимические и морфологические изменения в печени больных хроническим гепатитом после трансплантации аутологичных стволовых кроветворных клеток (1-я фаза клинических исследований)
Проблемы государственного регулирования в сфере клеточных технологий
Разработка методов применения аутологичных мезенхимальных стволовых клеток (МСК), получаемых из них кардиомиобластов, а также кондиционной среды из-под МСК при терапии различных заболеваний
Особенности дифференцировки клеток крови при проточном культивировании
Влияние сроков трансплантации мезенхимных стволовых клеток на репарацию сердечной мышцы крыс после инфаркта
Репарация костной ткани с помощью мезенхимных стволовых клеток
...
Обсудить на форуме
