Биохимические и морфологические изменения в печени больных хроническим гепатитом после трансплантации аутологичных стволовых кроветворных клеток (1-я фаза клинических исследований)

Библиотека < "Стволовые клетки: законодательство, исследования и инновации. Международные перспективы сотрудничества" (тез. докл.), 2007 г < Тезисы на русском языке ...

Киясов А.П., Одинцова А.Х., Фаррахов А.З., Кундакчян Г. Г., Газизов И.М., Абдулхаков С.Р., Гумерова А.А.

(Банк стволовых клеток Казанского государственного медицинского университета, Республиканская клиническая больница МЗ РТ; e-mail: sozinov@kgmu.kcn.ru)

Способность кроветворных стволовых клеток стимулировать регенерацию печени была показана в экспериментах на животных (Fujii et al, 2002; Kakimura et al., 2003; Masson et al., 2004) и после резекции печени у человека (Esch et al., 2005). В рамках первой фазы клинических исследований, проведенных в Великобритании, больным хроническим гепатитом в воротную вену или в печеночную артерию трансплантировали аутологичные CD34+ клетки. Через 60 дней после трансплантации отмечено улучшение общего самочувствия больных и нормализация функциональных проб печени (Gordon et al., 2006). Аналогичное исследование было проведено в Японии, когда больным с циррозом печени вирусной этиологии внутривенно вводили фракцию мононуклеаров, полученных из костного мозга. Дополнительно к улучшению биохимических показателей было обнаружено усиление пролиферативной активности гепатоцитов и ?-фетопротеин в клетках паренхимы (Terai et al., 2006). Таким образом, на момент начала нашей работы имелись теоретические, экспериментальные и клинические предпосылки для проведения - ограниченных клинических исследований - «лечения хронических гепатитов аутологичными гемопоэтическими стволовыми клетками». Пакет документов, включая протокол, необходимых для начала проведения клинических исследований был утвержден Ученым советом Казанского ГМУ и Этическим комитетом Минздрава РТ.

Критерием включения пациентов было, наличие хронического токсического (этанолового) гепатита и цирроза печени, класса А по Чайлд-Пью. В настоящий момент в клиническом исследовании находятся три пациента и отобраны еще 12 пациентов. При включении в клиническое испытание у пациентов отмечалось повышение цитолиза (до 2N), повышение ?- ГТП (до 2-4N) и снижение ПТИ (протромбинового индекса) до 70%.

До начала стимуляции выхода стволовых кроветворных клеток из костного мозга в кровь, больным была проведена биопсия печени. Стимуляцию проводили Нейпогеном, течение 5 дней. Забор фракции мононуклеаров проводили на клеточном сортере MSC+, согласно протоколу изготовителя. Анализ выделенных клеток показал, что содержание ядросодержаших мононуклеаров составило 1,7х106 (1-й больной), 1,4х106 (2-й больной), 2х106 (3-й больной) в 1 мл. 20 мл клеточного концентрата были введены в чревный ствол в течение трех часов после выделения. Введение клеток в чревный ствол прошло без осложнений. Уже на следующий день пациенты вели обычный образ жизни.

Наблюдение за больными в течение 4-х недель после введения стволовых клеток показало, что улучшилось общее самочувствие, исчезли дискомфорт в правом подреберье и слабость. Через месяц после введения стволовых клеток у всех больных снизился цитолиз, повысился протромбиновый индекс, произошло снижение ?-ГТП, в одном случае до нормы (Таблица 1). Клиническое улучшение, характеризующееся уменьшением слабости, улучшением аппетита, повышением работоспособности, улучшением настроения наблюдалось во всех случаях.

Повторная биопсия печени была проведена через месяц после трансплантации. Сравнительный анализ индекса гистологической активности (ИГА) представлен в Таблице 2. У двух больных до трансплантации индекс гистологической активности был выше 12 баллов, что соответствует тяжелому хроническому гепатиту и у одного 12 баллов, что является верхней границей для хронического гепатита умеренной активности. Через месяц после трансплантации у всех больных активность гепатита была умеренная, произошло снижение ИГА на 2-3 балла за счет уменьшения внутридольковых некрозов, дегенераций паренхимы и портального воспаления. Биоптаты окрашивали с антителами против ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA), альфа-гладкомышечного актина (?-ГМА) и CD34. PCNA позволяет выявить делящиеся клетки, ?-ГМА является маркером миофибробластов, которые синтезируют макромолекулы соединительной ткани и способствуют развитию фиброза. CD34 в норме отсутствует в эндотелии синусоидов и появляется в эндотелиальных клетках при капилляризации синусоидов. Данные иммуногистохимического исследования представлены в Таблице 3.

Полученные нами данные позволяют говорить, что трансплантация аутологичных гемопоэтических стволовых клеток в чревный ствол больных хроническим гепатитом в стадии тяжелого фиброза (цирроза класса А по Чайлд-Пью) является безопасной процедурой и не наносит вред здоровью пациента. После трансплантации улучшаются общее состояние больного и фукциональные пробы печени (снижается цитолиз и уровень ?-ГТП, повышается протромбиновый индекс). Через 1 месяц после трансплантации уменьшается индекс гистологической активности хронического гепатита за счет снижения уровня портального воспаления и выраженности внутридольковых некрозов. Уменьшается количество миофибробластов в паренхиме печени, значительно снижается пролиферация гепатоцитов, исчезает перисинусоидальный фиброз. На фоне исчезновения перисинусоидального фиброза эндотелий перестает экспрессировать CD34 и приобретает свойственный синусоидам печени фенотип.