Лобынцева Г. С., Ю.В.Гладких, И.В.Ворожка, И.Ф.Самборская
(Институт клеточной терапии, Криобанк аутологичной кордовой крови, Киев, Украина; e-mail: criobank@stemcellclinic.com.ua)
Уровень инфекционного заражения населения очень высок, особенно распространены урогенитальные инфекции среди молодых людей детородного возраста, которые являются нашими потенциальными донорами пуповинной крови. Чистота препаратов пуповинной крови гарантирует качественное использование их в клинике. Так как в рекомендациях МОЗ Украины требуется обследовать донорскую кровь методом ИФА, мы сочли необходимым провести с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) более широкие исследования материала, поступившего в наш криобанк.
До недавнего времени считалось, что наиболее частыми возбудителями внутриутробных инфекции являются цитомегаловирусы, вирусы простого герпеса 1 и 2 типов, возбудители токсоплазмоза и краснухи. Однако результаты последних исследований во многом изменили представления, как об этиологической структуре внутриутробной инфекции, так и о частоте внутриутробного инфицирования в целом.
Целью нашей работы было определение инфекционного агента в аутологичной кордовой крови и плаценте, а также проведение сравнительного анализа инфицированности кордовой крови и абортивных плодов 6 - 12 недель гестации, полученных во время добровольного прерывания беременности. Так как при внутриутробных инфекциях отсутствуют специфические симптомы, целесообразно применять современные методы диагностики. Все результаты нами получены с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и некоторые образцы были дополнительно подвергнуты иммуноферментному анализу (ИФА). Контроль стерильности проводили по классическим микробиологическим методикам.
Таблица 1. Выявление инфекционного агента в аутологичной кордовой крови и плаценте (n=180).
В таблице 1 показана встречаемость различных видов инфекций в кордовой крови и плаценте из которой видно, что из 180 образцов цитомегаловирус определили в плаценте - 7,2%, в кордовой кровь новорожденных вирус не выявлен. EBV также не обнаружен в крови, но найден в плаценте (3,6%). РНК вируса гепатита С найдена в 3,6% кордовой крови и 5,4% - плаценты. В анамнезе рожениц не было сведений о наличие инфекционных заболеваний.
Если роды протекали с осложнениями: ранний отход вод, длительное нахождение плода в безводном пространстве, околоплодные воды с запахом и измененным цветом, при бактериологическом контроле кордовой крови и плаценты отмечено присутствие бактериальной флоры, т.е. кровь (6,6%) и плацента (25,5%) были не стерильными.
Многие авторы считают, что урогенитальные и вирусные инфекции попадают гематогенным путем, а бактериальная флора - восходящим (контаминация) при родах. Есть мнение, что для будущего ребенка опасны инфекции, с которыми женщина встретилась во время беременности, а инфицирование до беременности, кроме хронических очагов в мочеполовой сфере, не опасно.
Мы провели исследование 200 абортивных эмбрионов (табл.2) и установили следующее: наиболее распространенной инфекцией является микоплазма (Mycoplasma hominis) (17%), выявляется возбудитель с 6 по 12 неделю внутриутробного развития в ткани печени, почек, сердца, мозга и кроветворных клетках эмбрионов. 5% эмбрионов поражены хламидиями, 6% - уреаплазмой, 4% - гепатитом С, 2,5% - ЕВV, большое количество смешанных инфекций. 47% исследованных нами эмбрионов поражены различными видами инфекций, которые определяются уже на 6-10 неделе развития. Это свидетельствует о том, что названные выше пути проникновения инфекционного агента в данном случае не применимы.
При исследовании тканей иммуноферментным методом в 10 и 11 недельных эмбрионах, инфицированных ВИЧ и НСV, были обнаружены антитела к данным возбудителям. Однако в образцах, в которых найдены хламидии, уреоплазма, микоплазма, при тестировании ИФА-методом, антитела выявлены только единично на 11-12 неделе (Табл.2).
Таблица 2. Выявление инфекционного агента в тканях плодов 6-12 недель гестации (n=200).
500 образцов гемопоэтических клеток, выделенных из печени эмбрионов, были исследованы на оказание цитопатического действия (ЦПД) на клетки культуры VERA. В 143 обнаружены инфекционные агенты, однако ЦПД оказывали только единичные. Следовательно, не присутствие данных патологических агентов вызывало ЦПД, а, возможно, в клетках находились микроорганизмы, которые мы не определяли.
Таблица 3. Цитопатическое действие инфицированных препаратов гемопоэтических клеток эмбриональной печени на культуру VERO (клетки почки обезьяны) (n=500).
В инфицированных препаратах увеличивается количество моноцитов, макрофагов, а также стимулируется миелопоэз, отсутствующий в норме на данном этапе развития эмбриона. Появляются гранулоциты и эозинофилы, которые также участвуют в процессе фагоцитоза. По-видимому, в ответ на инфекционный агент включается механизм врожденного иммунитета, который запускает в пролиферацию клетки-предшественники грануломоноцитопоэза.
При изучении кроветворения в первом триместре беременности очень часто возникают разногласия в количественном определении кроветворных элементов, например E.Kelemen и соавт. в атласе приводят очень высокий процент моноцитов (до 70%), в других работах показано наличие лимфоцитов и иммуноглобулинов в эмбриональной печени 7 - 8 недель гестации и т.д. Однако ни один из авторов не провел сопоставимого анализа своих результатов с наличием инфекционных агентов в препаратах. Если исследовать только чистые образцы, результаты будут совершенно другими.
См. также:
Терапия экспериментального инфаркта миокарда у крыс с помощью сингенных мезенхимных стволовых клеток
Математическая модель аксонального роста в свободной полости и в пористой среде
Трансфекция мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) фактором роста эндотелия сосудов (VEGF)
Инфицированность кордовой крови и возможные пути проникновения патогенных агентов в плод
Клетки кордовой крови и тканевые препараты в схеме лечения ожоговой болезни
Коррекция стрессового недержания мочи у женщин с использованием ткане-инженерной конструкции
Трансплантация аллогенных культивированных клеток в лечении экспериментальных глубоких ожоговых дефектов роговицы у кроликов
Влияние аутотрансплантации различных клеток костного мозга на состояние поврежденного миокарда в разные сроки после инфаркта
Применение фетальных и биологических материалов в лечении хронических гепатитов и циррозов печени
Перспективы развития национального законодательства российской федерации в области исследования и применения стволовых клеток
...
Обсудить на форуме
