Панкратов Е.В.1, К.Н. Ярыгин2, С.Б. Никифоров1, С.А. Румянцева2, А.И. Аутеншлюс3, А.В. Шумкова1, В.А. Ступин2, М.Б. Опольский4, Н.Н. Алферов1, В.Н. Ярыгин2
(1 - Научно-клинический центр онкологии и неврологии «Биотерапия», г. Новосибирск; e-mail: office@biotherapy.com; 2 - Российский Государственный медицинский университет, г. Москва; 3 - НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН, г. Новосибирск; 4 - Краснодарское муниципальное лечебно-диагностическое объединение, г. Краснодар)
Мотивацией к проведению настоящего исследования явились удручающая социальная дезадаптация больных рассеянным склерозом (РС) с наличием непрерывно прогрессирующего заболевания неизвестной этиологии и незначительная эффективность существующих медикаментозных терапевтических методик лечения этого процесса.
Безрезультатность повторной гормонотерапии, экстракорпоральных элиминационных методов, интерферона-b и копаксона определяет низкую перспективу терапевтического выбора.
Применяемая в отдельных случаях трансплантация стволовых кроветворных клеток после высокодозной химиотерапии векторно направлена на депрессию аутореактивных клонов Т-лимфоцитов с последующей реставрацией «физиологических» клеточных линий. При этом достигается ремиссия, а нейрорепаративный эффект дискутабелен. Технология крайне тяжела для больного и связана с высоким риском сопутствующих осложнений.
Известно, что мультипотентные мезинхимальные стромальные клетки способны дифференцироваться в клетки не мезодермального происхождения, включая нейроны, астроциты и миелинизирующие клетки периферической нервной системы, индуцируя механизмы нейрорепарации.
В рамках отраслевой программы РАМН «Новые клеточные технологии - медицине» реализовался утвержденный Протокол ограниченных клинических исследований в терапии РС с применением метода трансплантации аутологичных стволовых и прогениторных клеток костного мозга, в период с августа 2005 по декабрь 2006 года.
Материалы и методы. В исследование участвовали пациенты (n=12), неоднократно получавшие традиционные курсы лечения без позитивного результата и имеющие непрерывную прогрессию заболевания. Соблюдались юридические и этические нормы клинических исследований стандарта GCP. Клиническая оценка проводилась с применением модифицированной шкалы Куртцке (EDSS > 5 баллов), а визуализационная - МР-томографией головного и спинного мозга до и после лечения. Биологический материал пациентов (кровь и церебро-спинальная жидкость) исследовался методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) на возможные вирусные индукторы процесса демиелинизиции (геномы вирусных гепатитов, цитомегаловируса, вируса Эпштейн-Барра). Позитивный результат ПЦР исключал пациентов из Протокола наблюдений.
До лечения и в посттрансплантационный период исследовался количественный состав популяций и субпопуляций лимфоцитов, клетки - маркеры активации иммунной системы, реакции CD4+ и CD8+ после инкубации с нейроспецифическими белками, гуморальный иммунный ответ на ДНК и нейроспецифические белки. У больных под наркозом осуществлялся забор аспирата костного мозга из повздошной кости, выделение и культивирование стволовых мезенхимальных клеток (СМК) в течение 20-25 дней в условиях GMP-лаборатории. Трансплантация стволовых мезенхимальных клеток, в количестве 10 млн./клеток осуществлялась однократно по эндолюмбальной технологии введения.
Результаты исследования. Переносимость процедуры трансплантации аутологичных СМК оценивали как удовлетворительную. У всех наблюдаемых пациентов отмечался транзиторный субфебрилитет и постпункционная головная боль. Из них (n=5) данная клиническая картина сохранялась в течение 5-7 дней. Головная боль имела гипертензионный характер без признаков раздражения оболочек мозга. Симптоматическая терапия - назначение анальгетиков и дегидратация, купировала эти проявления в течение 2-3 дней. На декабрь 2006 г. срок наблюдения составил: у одного пациента - 13 мес, у 5-ти - 6 мес., у 3-х - 5 мес. и у 3-х - 4 мес. У 9 пациентов, неврологическое состояние в течение всего периода наблюдения было стабильное, без признаков прогрессии. У трех больных отмечались кратковременно-преходящее усиление основных неврологических симптомов, однако, без формирования нового неврологического дефицита.
Ни у одного больного не отмечено увеличения показателей инвалидности, по шкале EDSS, за весь период наблюдения. МРТ-исследование головного мозга в динамике не выявило появления новых очагов демиелинизации, однако, за искл. одного случая, не было и уменьшения количества «старых» очагов.
Таблица 1. Содержание популяций и субпопуляций лифоцитов, уровни антител к нативной и денатурированной ДНК, нейроспецифическим белкам у больных рассеянным склерозом до и после трансплантации аутологичных МСК.
(*) - статистически значимые различия (p<0,05)
У всех пациентов после трансплантация МСК отмечалось объективное повышение относительного содержания зрелых Т-клеток, В-клеток, CD38+ и CD25+. При этом, показатели зрелых клеток не достигали контрольных значений здоровых, тогда как СD38+ увеличились до пограничного уровня. Наблюдались признаки (активации -?) иммунной системы за счет увеличения содержания CD25+. В гуморальном звене иммунитета отмечалось увеличение уровней антител к нативной ДНК. Следует отметить отсутствие повышения уровня антител к нейроспецифическим белкам после трансплантации МСК. Наряду с традиционными исследованиями показателей клеточного звена иммунитета, была осуществлена оценка состава CD4+ и CD8+ после инкубации с нейроспецифическими белками и миелином. Достоверных изменений в составе данных субпопуляций после инкубации не отмечено.
Таблица 2. Относительное содержание субпопуляций Т-лимфоцитов и их реакции на инкубацию с нейроспецифическими белками.
Таким образом, применение технологии эндолюмбальных трансплантаций аутологичных стволовых мезенхимальных клеток свидетельствует о их позитивном эффекте в терапии некурабельного РС. Предварительные клинические наблюдения согласуются с ранее проведенными Zappia E. et al. (2005), Uccelli A. et al. (2006) экспериментальными данными на острой форме модели РС, хотя различаются способами введения МСК. Дальнейшие клинические исследования в более продолжительном сроке наблюдения предоставят объективную целесообразность использовании данной биомедицинской технологии трансплантации МСК в лечении больных с непрерывно прогрессирующим течением РС.
См. также:
Влияние аутотрансплантации различных клеток костного мозга на состояние поврежденного миокарда в разные сроки после инфаркта
Применение фетальных и биологических материалов в лечении хронических гепатитов и циррозов печени
Перспективы развития национального законодательства российской федерации в области исследования и применения стволовых клеток
Применение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток для лечения больных с хронической сердечной недостаточностью
Роль ионов кальция в регуляции роста эмбриональных стволовых клеток мыши in vitro
Получение пересеваемой клеточной культуры клеток Drosophila melanogaster, трансгенных по гену нейротрофического фактора млекопитающих NGF?
Стромальные клетки жировой ткани - ангиогенные свойства и терапевтический потенциал
Создание адекватного микроокружения для стволовых клеток должно определять эффективность технологий заместительной терапии
Клеточная терапия хронической критической ишемии нижних конечностей
Бизнес и стволовые клетки
...
Обсудить на форуме
