Смирнова Г. О., С.Ю. Жидких, В.И. Пар, В.В.Бурунова, Ю.Г. Суздальцева, В.А. Ступин, К.Н. Ярыгин
(ГОУ ВПО Российский Государственный Медицинский Университет; e-mail: katerina@hospital15.com)
В начале 90-х годов ХХ века многие развитые страны мира начали осуществление научных программ по проблеме «Стволовая клетка». В Российской федерации президиум РАМН 29 мая 2002 г. утвердил отраслевую программу «Новые клеточные технологии - медицине». Одним из флагманов научно-исследовательских медицинских центров России, занимающихся разработкой этой проблемы, является Российский Государственный Медицинский Университет, в котором с января 2004 года, после получения разрешения Росздравнадзора, проводятся клинические испытания с использованием клеточных технологий при ряде патологических состояний в неврологии, гепатологии, сосудистой и пластической хирургии. Все исследования в РГМУ, начиная с получения материала и заканчивая непосредственным проведением клеточной трансплантации, проводятся с соблюдением существующих правовых, юридических и этических норм Российской Федерации, а также других нормативных документов и рекомендаций, касающихся этой области медицины. В последние время все больше внимания уделяется таким источникам получения культуры клеток как пуповинная кровь, пуповина и плацента новорожденных, учитывая простоту забора биоматериала, отсутствие морально-этических препятствий, высокий пролиферативный потенциал полученных культур клеток. Поэтому для коррекции состояния кожи и лечения ран в лаборатории РГМУ были разработаны препараты, изготовленные на основе культур фибробластоподобных клеток пуповины человека (ФП), выделенных из пуповины после нормальных родов на 39-40 недели гестации, и аутологичных фибробластов кожи человека (АФК) - Суспензии АФК и ФП.
Необходимым этапом в работе является характеристика цитофенотипического профиля (экспрессии поверхностных и цитоплазматических белков), а также способности к дифференцировке в ткани мезодермы клеток полученных культур ФП и АФК, что позволяет прогнозировать возможности клинического использования, терапевтические эффекты, и возможные осложнения при трансплантации. Результаты исследований культур АФК и ФП in vitro показали преимущества использования культуры ФП для терапевтического использования, т.к. ФП, в отличие от АФК, экспрессируют значительное количество поверхностных белков-маркеров стволовых и прогениторных клеток, нестин, коллагены І и ІІ типов, широкий спектр ангиогенных факторов, а также обладают способностью дифференцироваться в жировую, хрящевую, и частично в костную ткани, что позволяет прогнозировать хороший ревитализирующий эффект при введении в дерму и быстрое заживление ран.
Полное представление о безопасности и эффективности использования препаратов на основе клеточной культуры можно получить лишь в результате клинических исследований. Препараты Суспензия АФК и Суспензия ФП прошли исследования на отсутствие ДНК и РНК инфекционных агентов, проведены экспериментальные исследования и оценена их безопасность на животных, оценена безопасность и эффективность при 1 и 2-м этапе клинических исследований. На доклиническом этапе исследования животным подкожно в область боковой поверхности живота делали 10 инъекций суспензий ФП и АФК по 0,1 мл каждая.
Вводили препарат в концентрациях 500 тыс. кл/мл и 5 млн. кл/мл физиологического раствора. Контрольную группу составили 10 животных, которым вводили физиологический раствор.
На всех сроках исследования животные оставались активными, в их состоянии не наблюдали никаких отклонений. Проведенные исследования показали, что суспензии АФК и ФП не токсичны и апирогенны и могут быть использованы в клинических исследованиях с участием человека.
На первом этапе клинических исследований оценивалась безопасность использования суспензий АФК и ФП у 30 здоровых (по критериям ВОЗ) добровольцев 30-60 лет. Пациентам интрадермально вводились суспензии АФК и ФП в дозе 500.000 или 1.000.000 клеток в 5,0 мл физиологического раствора. Оценивали безопасность процедуры и возникновение осложнений в день первого введения и далее через 2 недели, 1 и 3 месяца. На всех сроках наблюдения не было отмечено появления нежелательных реакций как местного, так и системного характера ни у одного пациента.
Во второй фазе клинических исследований клеточная терапия была применена у 55 пациентов с вялогранулирующими ранами и трофическими язвами в возрасте от 17 до 75 лет.
Суспензию ФП вводили интрадермально на глубину 2-4 мм по периферии раневой поверхности. Вводимая доза составила от 2 до 5 млн клеток в 5,0 мл физиологического раствора. Рану (язву) затем закрывали сухой стерильной марлевой повязкой.
Эффективность инъекций суспензии ФП оценивали в сроки через 7, 14 дней и 1 месяц от проведения процедуры по изменению площади раны, росту эпителия и грануляционной ткани.
При лечении пациентов с ранами у 48 из 55 пациентов (87,3%) отмечали высокий темп роста грануляционной ткани и эпителия, что приводило к уменьшению площади раны в среднем на 17 см2, через 7 дней площадь раны уменьшалась в 1,5 -2 раза, рана очищалась от экссудата и фибринозных наложений, появлялись активные грануляции, улучшалась микроциркуляция кожи в области раны.
Сроки заживления ран были значительно меньше, чем у пациентов, получавших стандартную терапию.
Во второй фазе клинических исследований клеточная терапия была также применена для коррекции возрастных изменений мягких тканей лица у 102 пациенток в возрасте от 32 до 66 лет. Суспензии АФК и ФП вводили интрадермально на глубину 2-4 мм по всей поверхности лица и шеи. Количество клеток составляло от 2 до 5 млн. в 5,0 мл физиологического раствора. Эффективность инъекций суспензий АФК и ФП оценивали через 14 дней, 1, 3 и 8 -12 месяцев по изменению эластичности, микроциркуляции с использованием современных инструментальных методов исследования (эластометрия, лазерная допплеровская флоуметрия, транскутанное напряжение кислорода).
У пациентов отмечали объективное повышение эластичности и микроциркуляции кожи на всех сроках наблюдения, увеличение ее толщины и однородности, уменьшение морщин. Наибольшее повышение эластичности наблюдалось в параорбитальной области (рисунок 1)
Рисунок 1 Повышение эластичности кожи при проведении клеточной терапии.
При морфологическом исследовании кожи пациентов через 1 месяц после введения суспензии ФП и АФК отмечали увеличение количества функционально активных фибробластов.
Таким образом, проведенное клиническое исследование показало, что использование суспензии АФК и ФП при интрадермальном введении является эффективным и безопасным методом в лечении длительно незаживающих ран и возрастных изменений кожи лица.
См. также:
Трансплантация аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга при остром инфаркте миокарда: результаты 6-месячного наблюдения
Дормантные стволовые клетки (ДСК) в эмбриогенезе и канцерогенезе
Особенности взаимодействия опаловых матриц на основе кубических упаковок наносфер SiO2 с клеточными структурами
Регуляция развития стволовых клеток поликлональными антителами
Репрограммирование посредством эмбриональных стволовых гибридных клеток
Сравнение цитофенотипических профилей клеток мезенхимального ряда, изолированных из различных тканей человека
Сравнение способности к дифференцировке в ткани мезодермы клеток мезенхимального ряда, изолированных из различных тканей человека
Экспериментальное исследование антиишемического эффекта препарата стволовых клеток пуповинной крови
Влияние стволовых клеток (СК) на течение инфаркта миокарда (ИМ) у свиней при интрамиокардиальном их введении (экспериментальное исследование на свиньях)
Исследование возможности репрограмирования мультипотентных мезенхимных стромальных клеток, выделенных из жировой ткани человека, после пересадки их в энуклеированный ооцит
...
Обсудить на форуме
