Лавров А. В.
(ГУ Медико-генетический научный центр РАМН, 115478, Москва, Москворечье, 1; e-mail: avlavrov@yandex.ru)
В настоящее время существует достаточное количество протоколов клинических исследований, что говорит не только о возможности, но и безопасности использования стволовых клеток, как минимум в некоторых областях. Интенсивно разрабатываются методы, позволяющие изменять и контролировать генетический аппарат клетки; стали рутинными процедуры трансфекции клеток, как in vitro, так и in vivo. Однако остаются нерешенными вопросы эффективной доставки генных конструкций в клетки, не изучены подробно реакции клетки на внедрение генетических конструкций, нет общепризнанных выводов о безопасности и эффективности таких конструкций. Во многих случаях клиническое применение клеточных технологий опережает фундаментальные исследования в этой области, что не отменяет необходимости тщательно анализировать и обосновывать новые подходы терапии.
Целью нашей работы является разработка протокола трансфекции МСК плазмидой, несущей ген VEGF и оценка последующих изменений в уровне экспрессии этого гена и влиянии всей процедуры на стабильность и жизнеспособность МСК.
Мы разработали метод липидной трансфекции плазмиды ps415VEGF в МСК. Предварительные данные свидетельствуют о положительном влиянии процедуры на пролиферацию МСК. Показана высокая эффективность выбранного метода липид-опосредованной трансфекции. Методом количественной ПЦР количество копий плазмиды в пересчете на одну клетку трансфецированной культуры составило 103. Морфологически клетки оставались неотличимым от контрольной нетрансфецированной культуры и сохраняли свою жизнеспособность по крайней мере на протяжении двух недель наблюдения. Отобраны образцы из экспериментальных культур для анализа уровня экспрессии гена методом обратной трансфкрипции с последующей количественной ПЦР. Данная работа проводится в настоящее время.
Наши результаты показывают, что липидная трансфекция обеспечивает высокую эффективность доставки конструкции, стимулирует пролиферацию и не влияет на морфологические характеристики культуры.
Работа выполняется при поддержке грантов РФФИ 06-04-49135 и НШ-1006.2006.7
См. также:
Терапия экспериментального инфаркта миокарда у крыс с помощью сингенных мезенхимных стволовых клеток
Математическая модель аксонального роста в свободной полости и в пористой среде
Инфицированность кордовой крови и эмбрионов ранних сроков гестации
Инфицированность кордовой крови и возможные пути проникновения патогенных агентов в плод
Клетки кордовой крови и тканевые препараты в схеме лечения ожоговой болезни
Коррекция стрессового недержания мочи у женщин с использованием ткане-инженерной конструкции
Трансплантация аллогенных культивированных клеток в лечении экспериментальных глубоких ожоговых дефектов роговицы у кроликов
Влияние аутотрансплантации различных клеток костного мозга на состояние поврежденного миокарда в разные сроки после инфаркта
Применение фетальных и биологических материалов в лечении хронических гепатитов и циррозов печени
Перспективы развития национального законодательства российской федерации в области исследования и применения стволовых клеток
...
Обсудить на форуме
